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按排行字母分类：猪苓菌核化学成分及液体发酵法生产猪苓甾体成分的初步研究--《西北农林科技大学》2010年硕士论文
猪苓菌核化学成分及液体发酵法生产猪苓甾体成分的初步研究
【摘要】：
中药猪苓来自是真菌猪苓的干燥菌核,是一种珍贵药材,但由于其野生资源日益枯竭,人工栽培又受到诸多自然条件的限制,导致市场供应短缺;利用发酵猪苓菌丝替代或部分替代猪苓菌核或和以发酵菌丝体为原料获取活性物质,成为当前猪苓研究的重点。为进一步开发发酵猪苓菌丝体的药用价值,探求猪苓菌核和发酵猪苓菌丝体药理活性的物质基础,本文在液体悬浮法生产猪苓甾体成分、猪苓发酵生产小试、菌核和发酵菌丝体中小极性化学成分分析,猪苓菌核的化学成分分离纯化等方面展开研究并获得以下主要结论:
1.以甾体含量为主要指标,并以菌丝体生长量及多糖含量为辅助指标,对用液体悬浮法生产猪苓甾体所需的培养基条件进行了初步研究,研究结果表明适合于猪苓甾体类化合物积累的最佳液体培养基为:葡萄糖28.0g/L,酵母膏4.0g/L,磷酸二氢钾1.00g/L,硫酸镁1.00g/L,维生素VB10.1g/L,1%羟甲基纤维素钠10mL/L。在此培养条件下每瓶所得菌丝体干重为2.050g,干菌丝体及发酵液中甾体含量分别达到了3.864mg/g, 3.768mg/100mL。此外在此液体培养基中菌丝体及发酵液的猪苓多糖含量分别为11.542 mg/g, 5.885mg/100mL。
2. 70L发酵罐发酵生产猪苓菌丝体时,接种量越大,猪苓菌丝达到生长稳定期的时间越短,在接种量分为3%、4%、5%时,达到生长稳定期的时间分别为8、6、5d,而稳定期转向衰亡期的时间不受接种量的影响,发酵培养中,菌丝体达到稳定时期后大约5天就会进入衰亡期,猪苓菌丝细胞开始自溶,菌丝干重得率下降;另外发酵培养猪苓菌丝对数生长期甾体含量较低,在菌丝体生长到稳定期后,菌丝体中甾体含量开始快速增加,在稳定中后期猪苓菌丝中的甾体含量达到最高。
3.利用GC/MSD方法对两者甲醇提取物的石油醚萃取相进行化学成分分析,从猪苓菌核甲醇提取物的石油醚萃取相的弱极性馏分和极性馏分中共鉴定出66个成分,其中弱极性馏分以烷烃为主,除正构烷烃外,还有一系列的含量较低的甾烷、烷基环己烷和五环三萜烷,极性馏分以脂肪酸及其酯和邻苯二甲酸二甲酯为主;发酵菌丝体两个馏分中共鉴定出50个成分,以脂肪酸、脂肪酸酯及其氧化物为主其他成分尤其是甾烷类和萜烷类含量极低。
4.应用固液萃取、硅胶柱层析、薄层制备(PLC)、重结晶等植物化学分离纯化手段,从猪苓菌核甲醇提取物中分离纯化出单体化合物经理化性质、IR、1H-NMR、13C-NMR分析鉴定分别为L1(麦角甾醇和麦角甾-7,22-二烯-3醇), L2(二十二碳酸), L3(12-三十一烷醇), L4(过氧化麦角甾醇), L5(N-(2′-羟基-二十四烷酰)-1,3,4-三羟基-2-十八鞘氨), L6(猪苓酮A和B),其中12-三十一烷醇为首次从该真菌中分离得到。
本研究初步筛选出液体悬浮培养生产猪苓的最佳培养基组成,并用该培养基进行了发酵生产小试;表明在不同批次的发酵过程中,稳定后期甾体含量最高;又以的发酵猪苓菌丝体为材料比较了菌核和菌丝体的中小极性化学成分种类及含量差异,并从猪苓菌核中分的单体化合物8个,其中12-三十一烷醇首次从该真菌总分得,以上研究结果,既为发酵发生产猪苓甾体提供了初步的工业参数,又进一步了丰富猪苓菌核的化学成分的组成,而且通过对两者小极性化学成分种类和含量分析,又可以为两者的开发利用提供新思路。
【关键词】：
【学位授予单位】：西北农林科技大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2010【分类号】：S567.39【目录】：
ABSTRACT8-13
第一章 文献综述13-32
1.1 猪苓的生物学特性13-15
1.1.1 猪苓的生态习性13
1.1.2 猪苓的形态结构特征13-14
1.1.3 猪苓与蜜环菌的关系14-15
1.2 猪苓栽培技术的研究进展15
1.3 猪苓液体发酵培养的研究进展15-17
1.3.1 猪苓液体发酵培养基筛选15-16
1.3.2 液体发酵生产多糖的研究16-17
1.3.3 发酵法生产猪苓甾体的研究17
1.4 猪苓的化学成分研究进展17-28
1.4.1 猪苓菌核的化学成分17-27
1.4.2 发酵猪苓菌丝体的化学成分27-28
1.5 猪苓的药理活性28-31
1.5.1 抗肿瘤活性28-29
1.5.2 增强免疫功能29
1.5.3 抗辐射、抗诱变作用29-30
1.5.4 保肝作用30
1.5.5 利尿作用30
1.5.6 对血小板聚集作用的影响30
1.5.7 抗衰老作用30
1.5.8 抗微生物、抗病毒、抗炎活性30-31
1.5.9 促进毛发生长作用31
1.5.10 其他生物活性31
1.6 立题的目的及意义31-32
第二章液体悬浮培养生产猪苓甾体的培养基筛选32-40
2.1 材料与试剂32-33
2.1.1 供试菌种32
2.1.2 培养基32-33
2.1.3 试剂和仪器33
2.2 实验方法33-35
2.2.1 培养方法33-34
2.2.2 甾体含量测定34
2.2.3 多糖含量测定34-35
2.3 结果与分析35-37
2.3.1 六种培养基中猪苓菌丝体的生长特性35-36
2.3.2 不同培养基对菌丝体干重、菌丝体和发酵液中甾体含量的影响36
2.3.3 不同培养基对菌丝体和发酵液中多糖含量的影响36-37
2.4 讨论37-40
2.4.1 不同培养基中猪苓菌丝生长规律37-38
2.4.2 不同培养基中猪苓菌丝及发酵液中甾体和多糖含量变化规律38-40
第三章 猪苓发酵生产小试40-45
3.1 材料与试剂40-41
3.1.1 供试菌种40
3.1.2 培养基40
3.1.3 主要试剂和仪器40-41
3.2 实验方法41
3.2.1 菌种活化41
3.2.2 液体菌种制备41
3.2.3 发酵培养41
3.2.4 发酵猪苓菌丝体生长曲线的绘制41
3.2.5 不同发酵时期猪苓菌丝体甾体含量的测定41
3.3 结果与分析41-43
3.3.1 发酵培养菌丝体形态41-42
3.3.2 发酵猪苓菌丝生长曲线42
3.3.3 各生长时期发酵猪苓菌丝体甾体含量42-43
3.4 讨论43-45
3.4.1 接种量对发酵时间的影响43
3.4.2 生长时期对发酵猪苓菌丝中甾体含量的影响43-45
第四章 菌核及发酵猪苓菌丝体小极性组分化学成分的研究45-60
4.1 材料与仪器45
4.1.1 材料45
4.1.2 主要仪器与试剂45
4.2 实验方法45-46
4.2.1 GC-MS 样品制备方法45-46
4.2.2 GC-MS 测定方法46
4.3 结果与分析46-58
4.3.1 猪苓菌核和菌丝体石油醚萃取相弱极性部分化学成分46-56
4.3.2 猪苓菌核和菌丝体石油醚萃取相极性部分化学成分56-58
4.4 讨论58-60
4.4.1 菌核及菌丝体石油醚萃取相弱极性部分化学成分比较58-59
4.4.2 菌核及菌丝体石油醚萃取相极性部分化学成分比较59-60
第五章 猪苓菌核化学成分分离纯化60-73
5.1 材料的来源及鉴定60
5.2 仪器和试剂60-61
5.3 实验方法61-63
5.3.1 猪苓菌核的提取分离61-62
5.3.2 各化合物的纯度检测62-63
5.3.3 单体化合物的熔点测定63
5.3.4 各化合物的光谱测定63
5.4 结果与分析63-72
5.4.1 化合物分离纯化结果63
5.4.2 各单体化合物纯度检测63-64
5.4.3 结构鉴定与波谱数据64-72
5.5 讨论72-73
第六章 结论73-75
参考文献75-81
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K18正版 猪苓的化学成分及其应用
赵英永,林瑞超
科学出版社
开&&&&&&本：16开
页&&&&&&数：139页
字&&&&&&数：211.000千字
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基本信息
书名:猪苓的化学成分及其应用
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作者:赵英永，林瑞超　著
出版社：科学出版社
出版日期：
ISBN：7
字数：211000
页码：139
版次：1
装帧：平装
开本：16开
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　　本书共分11章，包括猪苓的基源考证、生活习性、栽培及加工、化学成分及含量分析、理、代动力学、细胞毒活性、临床应用及市场开发前景等，由作者结合相关资料及自己的实际工作总结而成。该书的写作技术准确实用，简明扼要，通俗易懂，为易于理解，辅以必要的附图。该书的出版是为提高中质量、提高中产业科技含量而做的一项基础性工作，也是科技面向经济，为经济服务的实际行动。该书可供从事用植物种植及采收加工、综合利用的人员使用，也可供医工作者及医和农业院校师生阅读参考。
内容提要
　　本书作者在对猪苓系统研究的基础上，结合文献资料全面总结了猪苓的真菌学特性、种植经验、化学成分、理作用和临床应用，取材广泛，叙述简明，具有广泛的实用性。　　本书对猪苓的栽培、化学成分研究、临床应用很有参考价值。　　本书可供中学专业科研人员、中从业人员及大中专院校学生参考。
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