pcr反应是怎么用对照组检验DNApcr技术扩增dna没有

点击联系发帖人 时间：2020-03-19 13:49

pcr技术扩增dna

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1.做了32个样本约10ng/ul，一个目标基因两个参照基因，均三重复共计32*3*3=288个反应，试剂是2*SYBR；
2.计算三重复的cv值去除大于5%的数值，再取平均数计算方法是2－△△Ct，即样本相对拷贝数1=2-（（该样本目标基因ct值-该样本参照基因1的ct值）-MEDIA所有（样本目标基洇ct值-样本参照基因1的ct值））样本相对拷贝数2=2-（（该样本目标基因ct值-该样本参照基因2的ct值）-MEDIA所有（样本目标基因ct值-样本参照基因2的ct值）），最终相对拷贝数=2*MEDIA（相对拷贝数1相对拷贝数2）
3.问题是，拷贝数从0.5～3.5连续变化不是整数倍。看溶解曲线没什么问题，将荧光定量的产粅跑琼脂糖电泳目标基因有非特异的产物（之前36cyc没有非特异的条带，现在用的38cyc看文章说超过平台期会有非特异pcr技术扩增dna），ct值范围也茬25-30
4.如何解决？是计算方法不对还是啥的？还是需要补做实验得到pcr技术扩增dna效率进行校正？对最终拷贝数进行排序，发现中间的是兩拷贝是否是因为中位数有问题？或者样本的初始浓度有问题

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