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&做SDS-PAGE蛋白电泳，蛋白条带跑不出来
做SDS-PAGE蛋白电泳，蛋白条带跑不出来
作者 zzx1123
我是做真菌粗酶液的SDS-PAGE蛋白电泳，mark条带能跑出来，条带清晰度也很不错，但是样品条带没有跑出来，我的粗酶液样品浓度均在0.03-0.08mg/ml浓度范围，上样量是20ul,请问是不是蛋白浓度过低没有跑出来，SDS-PAGE电泳要求蛋白浓度至少为多少呢？
请各位指教，不甚感激
加大蛋白浓度试试，很可能出条带；蛋白浓度因菌株不同上样量也不同。另外配胶注意分离胶的浓度问题，
上样的蛋白量不少嘛& & 银染能看到不
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【求助】western blot跑出来有蛋白跑的痕迹但没有条带是什么原因呢
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这个帖子发布于2年零54天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
本人是western blot新手，刚开始做，这次曝光出来有蛋白跑的痕迹但没有条带，感觉蛋白应该问题不大，之前别人做虽然条带不好看，但还是有的，转膜的时候marker也转上去了，抗体就是actin，不过转完膜胶上靠近buffer的地方还有的点颜色，难道是转膜没完全吗？还是抗体有问题呢？求指教，大神帮帮忙！！！
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一般条带没出来可从这几个地方找原因：蛋白浓度，电泳条件，以及抗体.蛋白没问题，Mark也能能出来，说明主要还是电泳条件的事，建议：<font style="color:#: 参考抗体说明书，准备阳性对照，刚买的抗体一定要做这一步，排除抗体质量的问题。<font style="color:#:在抗体没有失效的情况下，检测下面几个问题a：细胞一般是不会出神马问题的，但是裂解液这个东西还是需要考虑的。遇到一个很经典的事情，用得公司买的RIPA裂解细胞，beta-actin的条带好看的不得了，目的条带就是木有，后来发现就是裂解液出问题的，换了裂解液立马正常了。b：样品木有问题了，遇到不好用得抗体，加大上样量，有助于条带的出现。根据目的蛋白选择合适的胶的浓度，以及转膜的时间（这个还是很重要，转膜不充分，转膜过了都会导致目的条带出不来）。一抗最好4°过夜。洗膜的的PH还是很重要，要调准。后面应该不会出神马问题的，但是还是需要考虑的。曝光延长时间。每一步出错都有可能导致条带出不来的。建议平时记录好实验笔记，有利于分析可能存在的问题。更多资料请访问实验专区>
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detaibio一般条带没出来可从这几个地方找原因：蛋白浓度，电泳条件，以及抗体.蛋白没问题，Mark也能能出来，说明主要还是电泳条件的事，建议：<font style="color:#: 参考抗体说明书，准备阳性对照，刚买的抗体一定要做这一步，排除抗体质量的问题。<font style="color:#:在抗体没有失效的情况下，检测下面几个问题a：细胞一般是不会出神马问题的，但是裂解液这个东西还是需要考虑的。遇到一个很经典的事情，用得公司买的RIPA裂解细胞，beta-actin的条带好看的不得了，目的条带就是木有，后来发现就是裂解液出问题的，换了裂解液立马正常了。b：样品木有问题了，遇到不好用得抗体，加大上样量，有助于条带的出现。根据目的蛋白选择合适的胶的浓度，以及转膜的时间（这个还是很重要，转膜不充分，转膜过了都会导致目的条带出不来）。一抗最好4°过夜。洗膜的的PH还是很重要，要调准。后面应该不会出神马问题的，但是还是需要考虑的。曝光延长时间。每一步出错都有可能导致条带出不来的。建议平时记录好实验笔记，有利于分析可能存在的问题。更多资料请访问实验专区>大神求解！
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我就是偷懒用了别人配的TBST这两次都没曝出条带，还是自己靠谱
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【求助】蛋白浓度很大，SDS跑胶没有条带
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这个帖子发布于5年零194天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
BCA测蛋白浓度1.4mg/ml，但是SDS跑胶没有条带，这是怎么回事呢？
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BCA测蛋白浓度1.4mg/ml，浓度似乎不大哦，用的组织还是细胞的样本？我的组织的一般都十多的。
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是自己纯的蛋白，这个浓度已经算是很大的了
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bca检测需要注意蛋白溶解液成分的影响，比如dtt等会导致溶液变色。请确认蛋白溶液里没有这些干扰因素。简便方法是加一点无蛋白液体进bca，看会不会变色。如果变色，换其他方法。
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&为什么western blot跑胶时，蛋白样品进入分离胶时，总是变弯，为什么？
为什么western blot跑胶时，蛋白样品进入分离胶时，总是变弯，为什么？
为什么western blot跑胶时，蛋白样品进入分离胶时，总是变弯，到了下面还会变的模糊，感觉像是指示剂跑散了的样子，为什么？求大神指教！
变弯不应该，可能是内液漏了，上样的时候左右没有加loadingbuffer补齐。溴酚蓝散了没事，不影响
会不会是浓缩胶和分离胶之间衔接不好？你做浓缩胶之前有没有把分离胶上面的水吸干？而且跑胶过程电压稳么？
可把电压调小一些。
还有一种可能是提取蛋白不纯含有杂质较多
样品浓度偏高、甘油含量过高、另外可能是样品中有沉淀，可能出现条带弯曲。
浓缩胶和分离胶的浓度不一样且在两块儿胶中的电压是不一样的，可能原因是：1、胶浓度有问题2、电压的问题3、蛋白样品的上样量有问题4、一些个人操作的问题。建议一一排查，做好实验记录。正常情况下，在电压的不同的情况下会有一些弯度，似碗状，倒没啥事情，
可能电压不稳，或者蛋白不纯，建议分部排查，祝好！
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与700万科研达人随时交流为什么琼脂糖电泳跑不出条带呢?
为什么琼脂糖电泳跑不出条带呢?提取质粒后紫外分光光度计测浓度为200多ng/ml,但是跑电泳却很弱,几乎看不到?这是为何呢?EB没问题,marker很亮很清晰.单位是ul/ml，打错了 不好意思。
在你提供的现有信息情况下,判断是你的核酸溶液不纯,建议用以下方法确认推测的原因：1)紫外分光光度计 先做一下 波长扫描吧,看看260nm有没有特征峰,若没有峰,说明纯度不够,就不用做下一步了.若有峰则2）2)计算一下OD260/OD280,若果此比值低于1.5 你最好重新纯化你的DNA溶液.
我有更好的回答：
剩余:2000字
与《为什么琼脂糖电泳跑不出条带呢?》相关的作业问题
染色后,当然还需要脱色液（有乙醇、醋酸）脱色,不脱色的话全是蓝色,不能区分条带.脱色后,条带才能显示出来.在跑SDS-PAGE时,需要点Marker,正常情况在染色、脱色后能至少看到Marker的条带.如果Marker都没有,那就是电泳问题了.
离心管和枪头都要进行高温湿热灭菌后才能使用.另外,你确定不是你样品本身的问题么?或者提取DNA的时候最后洗脱没有洗脱下来?
greenview没用过,只用过EB.我不在甲醛胶里加EB,好像那样背景比较高.我都是在变性RNA时在RNA&loading&buffer里加EB,胶上没什么背景.你先试一下看看吧. 再问： 请问用EB染色时，RNA每个泳道的上样量需要多少？大概每个泳道上点多少的RNA跑出来的胶效果最好？ 再答：
体系变化后会有些不同,但影响这么大,可能试剂没混匀,仪器孔加热不均一了,等等.如果25ul体系稳定,建议25ul就好.只是多P1管而已吧.
蛋白质,另外可能还有糖类之类的,如糖蛋白,多糖,所以整体黏糊糊的,跑不出点样空!
这个是PCR的结果跑的胶么?还是酶切 再问： PCR的 再答： 你这张图放反了，上面那条较模糊的带是引物二聚体的条带，一般PCR都会有这个，你也可以看到，大小很小。对了，你连Marker都没有点。带的形状是可以的，可以送去测序。不过你得分析你那些是正确大小的。再问： 噢，知道了谢谢~，我做的是真菌，用的引物是ITS1和
你这到底是切过了还是没切就跑胶啊. 再问： 我这个是作对照的，因为酶切时切不出来，所以做了这个，结果就这样了。 再答： 如果不是胶的染料问题 就是回收的问题咯 回收完测浓度没啊再问： 测了，浓度有点低。但是我做双酶切之前可以跑出亮带来，做对照只加水的时候也能跑出来，但是加了酶切缓冲液后就跑不出来了。 再答： 跑胶前得再
"排除浓度太淡"?怎么排除的?试剂盒用时间长了效果可能变差,或者本来产物的量就不高.如果不是浓度问题,会不会是电泳的问题,电泳缓冲液是不是该换了,EB是不是失效了等等.
实验操作出问题了吧,是DNA还是蛋白?估计你跑得是DNA吧,会不会点样点飘了?重来一次有可能就没问题了
这种实验,跑胶看RNA没什么意义,即使看到,也是rRNA,不是mRNA.直接往下做RT-PCR就是了.
没有问题,我就跑过.2%-2.5%的琼脂糖,电泳100V,35-40分钟左右,不要跑太长,90分钟肯定跑出去了.点样前先测一下你的样本浓度,DNA上样总质量小于50ng肯定看不到,50bp的样本质量很小,所以需要高浓度样本.其次,电泳前在胶下端缓冲液再均匀加入5ul左右二溴乙锭,由于ethidium bromide带有
上样缓冲液混合后进行变性,温度必须要超过95°,时间5—10min,如果没把握,可以处理10min.也有可能是漏胶,制胶时封胶要严,操作不熟练时可以多加一点,待聚合后用去离子水加入电泳槽内,看看是否会漏,如果不会把水倒掉,滤纸吸干后再加入凝胶.加样的问题,加样时注意不要刺破凝胶,以避免样品直接漏出.
蛋白污染 抽提的时候把蛋白相吸起来了
是不是母液量用少了 里面DNA量不足啊
提取的是总RNA的话,电泳肯定是可以看到条带的...这样的量,提取没有问题的话,直接用常规的1%-2%核酸胶就可以看到rRNA的条带（真核生物核糖体中通常含28S、18S、5.8S和5S 四种rRNA；原核生物中则含23S、16S和5S 三种rRNA）,rRNA是含量最多的RNA,EB染色可以看到.电泳没有问题却看不到
1. try low your agarose concentration, say, to 0.8%.2. heat your PCR mix at 60C for 5 minutes before loading it.3. when you run your gel, include one PCR withou
这个……是有点奇怪,蓝斑质粒没有插入基因,质量应该偏小,应该跑的快.这个原因也说不太好,如果能排除操作的问题的话,建议你通过迁移率算一下质粒的大小,然后和序列比对一下,看看酶切连接有没有什么意外,真的没见过这种情况
就只是你的目的基因菌液PCR扩增不出来么?不过我觉得你如果质粒、电泳、菌落PCR都能验证的话,菌液PCR结果如何都意义不大了.
实验没成功?}