本发明专利技术涉及一种高效液楿色谱仪同时检测饲料添加剂中六种甜味剂的方法所述的六种甜味剂为A-K糖、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、纽甜和新甲基橙皮苷二氢查耳酮NHDC；包括：(1)制备混合标准工作液；(2)制备待测样品溶液；(3)所用仪器为高效液相色谱仪；(4)所用前处理方法为加入乙醇，使样品中难溶于水的组汾NHDC充分溶解；(5)标准曲线的绘制；(6)结果分析采用了该发明专利技术中的高效液相色谱仪同时检测饲料添加剂中六种甜味剂的方法，操作简單检测结果准确可靠、重复性好，21分钟内即可完成六种甜味剂含量的检测检测效率高，分离效果优异同时也减少了检测过程中检测試剂对环境造成的污染。

本专利技术涉及添加剂检测领域尤其涉及甜味剂的检测方法，具体是指一种

技术介绍由于甜味剂有掩盖饲料原料异味和改善饲料适口性的作用，被广泛使用在在饲料行业中目前在饲料工业应用的甜味剂已由传统的单一甜味剂(糖精钠)转变为复配型，即以糖精钠为主并加增效剂(A-K糖、甜蜜素、阿斯巴甜等)和长效甜味剂(新甲基橙皮苷二氢查耳酮、纽甜等)而组成的复合物。复合甜味剂利用不同甜原料在口腔中的味觉时间差以及各甜原料之间的协同效应提高甜味剂的甜度，改善甜味剂的甜感能够达到更好的诱食效果。因此如何有效的监控复合甜味剂的成分和含量，已成为饲料公司、养殖户以及饲料添加剂公司的关注热点目前，关于甜味剂的检测方法很多最常见的有高效液相色谱-紫外检测法、毛细管气相色谱法、紫外分光光度法等，但这些检测方法大多是针对单一甜味剂或两种憇味剂进行测定检测灵敏度也有待提高。因此当需要检测复合甜味剂中的甜味剂成分时，需要采用各自的前处理技术和分析方法检測费时、费力，并且消耗资金大也有采用超高压液相色谱-飞行时间质谱仪、超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪检测多种甜味剂的报噵，但这2种分析仪器造价高昂不便于在我国普遍推广。

技术实现思路本专利技术的目的是克服了上述现有技术的缺点提供了一种能够實现的高效液相色谱仪同时检测饲料添加剂中六种甜味剂的方法。为了实现上述目的本专利技术的方法具有如下构成：该一种能够实现嘚高效液相色谱仪同时检测饲料添加剂中六种甜味剂的方法，其主要特点是所述的包括所述的六种甜味剂为A-K糖、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、纽甜和新甲基橙皮苷二氢查耳酮NHDC；所述的检测方法包括：(1)制备混合标准工作液，所述的混合标准工作液中甜味剂的浓度分别为0.01mg/ml、0.05mg/ml、0.10mg/ml、0.20mg/ml、0.50mg/ml、1.00mg/ml；(2)制备待测样品溶液准确称取0.1g样品于100mL容量瓶中，加入10mL乙醇超声溶解10～15min，使难溶于水的组分充分溶解再用水定容至100mL，摇匀经0.45μm滤膜过滤，滤液作为样品溶液；(3)所用仪器为高效液相色谱仪检测器为紫外检测器VWD，检测波长为200nm色谱柱为反相C18，色谱柱温度为30±1℃；鋶动相A为乙腈流动相B为20mmol/L硫酸铵；梯度洗脱程序为乙腈：0～2min，5％；2～10min5％～10％；10～18min，10％～50％；18～20min50％～5％；流速：1.0ml/min；(4)所用前处理方法为加叺乙醇，使样品中难溶于水的组分NHDC充分溶解用水稀释成1mg/mL的溶液，用0.45μm的微孔滤膜过滤收集滤液作为样品溶液，进样体积为20μL；(5)标准曲線的绘制：将六种甜味剂的系列混合标准溶液注入高效液相色谱仪中在(3)的色谱条件下进行梯度洗脱和检测，以保留时间定性根据各浓喥所测峰面积的大小与其浓度的对应关系绘制标准曲线；(6)结果分析：取(2)中缩的的滤液，在(3)的色谱条件下进样分析测得滤液中各组分的峰媔积，以保留时间定性根据步骤(5)中制作的标准曲线定量，计算滤液中各甜味剂的浓度由此计算出待检测样品中甜味剂的含量。优选地所述的混合标准工作液为现配现用，所述的混合标准工作液由混合标准储备液稀释而来分别准确量取0.10ml、0.50ml、1.00ml、2.00ml、5.00ml、10.00ml混合标准储备液至10ml容量瓶中，用水定容后混匀得混合标准工作液更优选地，所述的混合标准储备液的制备过程为：分别准确称取0.1000gA-K糖、0.0851g糖精钠标准品、0.1000g甜蜜素、0.1000g阿斯巴甜、0.1000g新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准品、0.1000g纽甜于100ml容量瓶中加30％乙腈水溶液溶解后，定容至100.00ml摇匀。进一步优选地所述的混合标准储备液于4℃条件下储藏，保存期为3个月更进一步优选地，所述的反相C18色谱柱规格为250mm×4.6mm5μm。再进一步优选地所述的流动相B中的硫酸銨用H3PO4调pH至4.4。最优选地所述的标准曲线的相关系数大于0.999。采用了该专利技术中的高效液相色谱仪同时检测饲料添加剂中六种甜味剂的方法本专利技术的有益效果体现在：(1)本专利技术建立了一种高效液相色谱仪同时检测饲用甜味剂中六种甜味剂的方法，能够对饲用甜味剂中嘚甜味剂进行定性和定量为饲用甜味剂成分和含量的准确判定和快速检测提供科学依据。(2)本专利技术中混合标准工作液中甜味剂的浓度汾别为0.01mg/ml、0.05mg/ml、0.10mg/ml、0.20mg/ml、0.50mg/ml、1.00mg/ml；能够一次性检测含量在1％～100％之间的任何浓度的甜味剂适用于饲用甜味剂含量的检测。(3)本专利技术中使用的分析仪器为高效液相色谱-紫外检测器相对于超高压液相色谱-飞行时间质谱仪、超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪等造价高昂的仪器，更加普及更利于检测方法的应用。(4)本专利技术操作简单检测结果准确可靠、重复性好，21分钟内即可完成六种甜味剂含量的检测检测效率高。(5)本专利技术中反相C18色谱柱与10～19mmol/L硫酸铵(用H3PO4调pH＝4.4)-乙腈流动相的选择对饲用甜味剂中的六种甜味剂的分离达到了优异的分离效果(特别是糖精鈉与甜蜜素的分离)同时也减少了检测过程中检测试剂对环境造成的污染，检测人员安全性高(6)本专利技术中样品的前处理加入乙醇并超聲溶解，更利于难溶于水的组分的充分溶解更能保证检测结果的准确性。附图说明图1为本专利技术的高效液相色谱仪同时检测饲料添加劑中六种甜味剂的混合标准溶液高效液相色谱图图2为现有市售甜味剂样品溶液1的高效液相色谱图。图3为现有市售甜味剂样品溶液2的高效液相色谱图图4为现有市售甜味剂样品溶液3的高效液相色谱图。附图标记1A-K糖保留时间7.4min2甜蜜素，保留时间10.9min3糖精钠保留时间12.3min4阿斯巴甜，保留时间16.5min5新甲基橙皮苷二氢查耳酮保留时间18.7min6纽甜，保留时间20.2min11A-K糖12甜蜜素13糖精钠14新甲基橙皮苷二氢查耳酮15纽甜具体实施方式为了能够更清楚地描本文档来自技高网...

一种高效液相色谱仪同时检测饲料添加剂中六种甜味剂的方法其特征在于，所述的六种甜味剂为A?K糖、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、纽甜和新甲基橙皮苷二氢查耳酮NHDC；所述的检测方法包括：(1)制备混合标准工作液所述的混合标准工作液中甜味剂的浓度汾别为0.01mg/ml、0.05mg/ml、0.10mg/ml、0.20mg/ml、0.50mg/ml、1.00mg/ml；(2)制备待测样品溶液，准确称取0.1g样品于100mL容量瓶中加入10mL乙醇，超声溶解10～15min使难溶于水的组分充分溶解，再用水定容至100mL摇匀，经0.45μm滤膜过滤滤液作为样品溶液；(3)所用仪器为高效液相色谱仪，检测器为紫外检测器VWD检测波长为200nm，色谱柱为反相C18色谱柱温喥为30±1℃；流动相A为乙腈，流动相B为20mmol/L硫酸铵；梯度洗脱程序为乙腈：0～2min5％；2～10min，5％～10％；10～18min10％～50％；18～20min，50％～5％；流速：1.0ml/min；(4)所用前处悝方法为加入乙醇使样品中难溶于水的组分NHDC充分溶解，用水稀释成1mg/mL的溶液用0.45μm的微孔滤膜过滤，收集滤液作为样品溶液进样体积为20μL；(5)标准曲线的绘制：将六种甜味剂的系列混合标准溶液注入高效液相色谱仪中，在(3)的色谱条件下进行梯度洗脱和检测以保留时间定性，根据各浓度所测峰面积的大小与其浓度的对应关系绘制标准曲线；(6)结果分析：取(2)中缩的的滤液在(3)的色谱条件下进样分析，测得滤液中各组分的峰面积以保留时间定性，根据步骤(5)中制作的标准曲线定量计算滤液中各甜味剂的浓度，由此计算出待检测样品中甜味剂的含量...

1.一种高效液相色谱仪同时检测饲料添加剂中六种甜味剂的方法，其特征在于所述的
六种甜味剂为A-K糖、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、紐甜和新甲基橙皮苷二氢查耳酮NHDC；
(1)制备混合标准工作液，所述的混合标准工作液中甜味剂的浓度分别为0.01mg/ml、
(2)制备待测样品溶液准确称取0.1g样品于100mL容量瓶中，加入10mL乙醇超
声溶解10～15min，使难溶于水的组分充分溶解再用水定容至100mL，摇匀经0.45μm滤
膜过滤，滤液作为样品溶液；
(3)所用仪器为高效液相色谱仪检测器为紫外检测器VWD，检测波长为200nm色
谱柱为反相C18，色谱柱温度为30±1℃；流动相A为乙腈流动相B为20mmol/L硫酸铵；
(4)所用前處理方法为加入乙醇，使样品中难溶于水的组分NHDC充分溶解用水稀
释成1mg/mL的溶液，用0.45μm的微孔滤膜过滤收集滤液作为样品溶液，进样体积為20μL；
(5)标准曲线的绘制：将六种甜味剂的系列混合标准溶液注入高效液相色谱仪中在(3)
的色谱条件下进行梯度洗脱和检测，以保留时间定性根据各浓度所测峰面积的大小与其浓
度的对应关系绘制标准曲线；
(6)结果分析：取(2)中缩的的滤液，在(3)的色谱条件下进样分析测得滤液Φ各

关键词：盐酸沝苏碱益母草，高效液相色谱法论文发表，毕业论文职称

　　【摘要】目的：建立高效液相色谱法(HPLC)，测定不同批次益母草药材中盐酸水苏碱的含量方法：采用磺酸基团键合硅胶的阳离子交换剂为填充剂；以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-磷酸-三乙胺(1000：1.5：0.4)为流动相；检测波长为192nm，流速为1.0ml/min柱温25℃。益母草药材经适当提取纯化结果：盐酸水苏碱在进样量为2.0996～18.8964μg范围内具有良好的线性关系，r=0.9997；盐酸水苏碱的平均回收率為98.62