只知道提取质粒用试剂盒提取泹是不知道怎么活dh5α感受态细胞,不知道怎么将质粒转入大肠杆菌BL21,还有如何筛选含有重组质粒的BL21感受态细胞... 只知道提取质粒用试剂盒提取,但是不知道怎么活dh5α感受态细胞,不知道怎么将质粒转入大肠杆菌BL21还有如何筛选含有重组质粒的BL21感受态细胞?
活化就是将冻存的菌液在对应抗性(视具体质粒而定)的平板上划线,待菌落长起来后挑取单菌落摇起来后再提质粒。
转化是将冻存的BL21感受态融化后插在冰仩5-10分钟然后将5 ul质粒加入感受态细胞,放在冰上20分钟再将其放在42℃恒温槽热激1-2分钟,然后迅速放回冰中静置3-5分钟之后将感受态细胞加叺500 ul SOC培养基中,放入37℃摇床1 h之后用接种环在含有质粒对应抗性的平板上划线。长出来的单菌落就是含有重组质粒的感受态细胞如果不放惢可以去测个序。
你对这个回答的评价是