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【求助】急求！！内参上样量怎么调
楼层直达：
这个帖子发布于3年零72天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
本人做wb已经有一段时间
所在的实验室师哥师姐做的时候都不进行蛋白定量 做出的内参根据肉眼看大致灰度
根据灰度的不同进行上样量的微调
最后内参感觉一致根据调整好的上样量做目的基因 然后扫灰度 然后进行目的和内参的比值。
我想问一下1
这样做出来的结果根据肉眼调节可靠度怎么样？
老师建议我如果不进行蛋白定量但是保证上样量相同，例如都加6ul，目的内参分子量相差不大跑在一板胶上（避免上样和配胶的误差）。但是跑出来的内参可能灰度有差异，也不用调节内参，直接用目的比上内参求比值。这样做可不可以，因为wb是一个半定量的，都是最后看比值。
希望能够得到大家的回复，众人拾柴火焰高，希望得到大家的帮助，解决我的困扰。谢谢！！期待你的回复！！
不知道邀请谁？试试他们
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我真佩服你们实验室，这样都能做出实验来！蛋白上样前要定量啊？蛋白浓度不会测吗？然后根据浓度算出每个样品上样体积，还目测，真行啊，这是科研不是在赶集买东西，差个几毛就算了。你可以说算比值就行了，那你看过那篇文献的内参是乱七把糟的？你要是想发表paper那就按约定俗成的要求
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zhlong 我真佩服你们实验室，这样都能做出实验来！蛋白上样前要定量啊？蛋白浓度不会测吗？然后根据浓度算出每个样品上样体积，还目测，真行啊，这是科研不是在赶集买东西，差个几毛就算了。你可以说算比值就行了，那你看过那篇文献的内参是乱七把糟的？你要是想发表paper那就按约定俗成的要求谢谢你的回复 实验室之前是用蛋白定量的测浓度
但是定量的结果依然不是很准 所以就没有人在做了
基本上现在就是先调节内参 根据灰度提高或者减少上样量
就是保持内参的灰度值相差在30%之内 然后根据调节好的内参的上样量进行目的基因
我也挺困惑的
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估计你们定量的条件没弄好，或试剂不行，反正我觉得估算其实很不准，western本来分辨率就很差的，还是严谨点比较好
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我们测了蛋白含量也还需要调整上样量，其实在组织处理时，根据组织重量给以同比例的裂解液，蛋白含量相差不多，跑个内参再调整。即便测了蛋白浓度，也可能有30%的误差。
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xuqingyou 我们测了蛋白含量也还需要调整上样量，其实在组织处理时，根据组织重量给以同比例的裂解液，蛋白含量相差不多，跑个内参再调整。即便测了蛋白浓度，也可能有30%的误差。谢谢回复
对 我们是根据组织称重以后按比例加入裂解液 然后都按照6ul的起始量上样 跑内参 组织相对于细胞来说内参调节起来就比较麻烦 同等条件每次可能跑出来都不一样 wb做起来不太容易我觉得
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